Før eksperimentet skal alle reagenser og prøver afbalanceres til stuetemperatur; efter omsmeltning skal prøverne centrifugeres igen og supernatanten udtages til testning; til reagenser eller prøveforberedelse, bland og undgå skumdannelse; kalibrering og prøver anbefales til duplikattestning.

1. Tilføj ple: tilsæt standardarbejdsopløsningen til de første to brønde efter tur, og tilsæt to huller for hver koncentration af arbejdsopløsning, 100 μ L af hver brønd. Prøver, der skal testes, tilsættes andre brønde, 100 μ L pr. brønd (for prøvekoncentration over testområdet, prøve fortyndet med standard- og prøvefortyndinger). Mikropladen blev filmcoatet og inkuberet ved 37°C ℃ i 90 min. Tip: Når du tilføjer prøven til bunden af ​​mikropladen, så prøv ikke at røre ved hulvæggen, ryst og bland forsigtigt for at undgå at danne bobler. Den ekstra tid bør kontrolleres inden for 10 minutter.

2. Biotinyleret antistof/antigen: Kassér væsken og ryst tør uden vask. 100 μL biotinyleret antistof/antigen arbejdsopløsning blev straks tilsat til hver brønd, blandet, mikroplade plus filmcoatet og inkuberet ved 37 ℃ i 1 time.

3. Vask: Ryst væsken i hullet, tilsæt 350 μL vaskemiddel til hver brønd, læg i blød i 1-2 minutter, sug eller ryst væsken af ​​i mikropladen, og dup tør på det tykke absorberende papir. Gentag dette vaskepladetrin 3 gange. Tip: Vaskemaskinen kan bruges her og i andre vasketrin. Hvert trin i vask er afgørende for eksperimentet.

4. HRP-enzymkonjugat: 100 μ L enzymkonjugat arbejdsopløsning pr. brønd, blandet, belagt med film og inkuberet ved 37°C ℃ i 30 minutter.

5. Vask: kassér væsken i brønden, og vask pladen 5 gange på samme måde som trin 3.

6. Substrat: tilsæt 90 μL substratopløsning (TMB) til hver brønd, bland godt, tilsæt filmcoating og inkuber ved 37 ℃ i ca. 15 minutter. Bemærk: Inkubationstiden bør forkortes eller forlænges i henhold til den faktiske farveudviklingssituation, men ikke over 30 minutter. Den kan afsluttes, når der vises en tydelig gradient i standardhullet.

7. Opsigelse: Tilføj 50 μ L termineringsopløsning til hver brønd for at afslutte reaktionen. Bemærk: Tilsætningsrækkefølgen for termineringsopløsningen skal være den samme som for substratopløsningen.

8. Aflæs: Mål straks den optiske densitet (OD) af hver brønd ved 450 nm med en mikropladelæser. Mikropladelæseren skal åbnes på forhånd for at indstille testproceduren.

9. Efter forsøget sættes det ubrugte reagens tilbage i køleskabet i henhold til den angivne opbevaringstemperatur indtil holdbarheden.