Nyheder

Hjem / Nyheder / Detaljerede trin af centrifugering til ekstraktion af cytoplasmatiske og nukleare proteiner ved desktop lavhastigheds frysecentrifuge

Detaljerede trin af centrifugering til ekstraktion af cytoplasmatiske og nukleare proteiner ved desktop lavhastigheds frysecentrifuge

Sendt af Admin | 23 Mar
Den stationære lavhastigheds frysecentrifuge bruges i laboratoriet til den primære separation og udvinding af biologiske makromolekyler, sedimenter osv. Dens drejelige hoved er hovedsageligt lavet af aluminiumslegering, som er af flad type og vinkeltype. Centrifugalrøret er lavet af hårdt glas, polyethylen hård plast og rustfrit stålrør. Centrifugen er udstyret med en drivmotor, en timer, en regulator (hastighedsindikator) og et kølesystem (justerbart temperaturområde er -20~ 40 ℃), som kan erstatte de roterende hoveder med forskellige kapaciteter og forskellige typer rotationshastigheder iht. til centrifugalmaterialets behov.
Detaljerede trin af centrifugering til ekstraktion af cytoplasmatiske og nukleare proteiner ved desktop lavhastigheds frysecentrifuge:
1. Bestem cellevæksttilstanden. Cellevæksttilstanden skal være 80 % eller bedre:
2. Centrifuger ved 1500 r/min. i 5 min
3. Kassér supernatanten, vask cellerne med samme volumen kold PBS, og gentag 3 gange som i trin 2
4. I henhold til den estimerede nedbørsmængde tilsættes 5 gange af volumenet af isotonisk sisbuffer i cellepartiklerne for at få cellerne til at suspendere forsigtigt og undgå skum så vidt muligt
5. Tilføj lysisbuffer i de suspenderede celler og læg den på isen i 15 minutter for at lade cellerne udvide sig, hvilket kan kontrolleres med mikroskop
6. Til de ekspanderede celler i celleeksperimentet tilsættes 10 % IGEPALCA-630 for at få den endelige koncentration til at nå 0,3 %, bland godt og tilsæt forsigtigt
7. Centrifuger med det samme (brug 1,5 ml EP-rør ved 5500 r/min i 30 sekunder for store mængder; brug 50 ml rør ved 5500 r/min i 2 minutter til store mængder)
8. Overfør supernatanten (cytoplasmatisk protein) til et nyt fryserør
9. Suspender celler med 5 gange volumen af ​​suspenderede partikler i isotonisk buffer og bland godt
10. Centrifuger cellesuspensionen ved 1500 r/min i 5 min, og fjern supernatanten
11. Suspender partikler med 2/3 gange volumenet ekstraktionsbuffer
12. Placer røret på den vibrerende mixer, ryst og bland ved 700 r/min i 15 min. og derefter ved 1400 r/min i 15 min. Hele processen skal være omhyggelig med at undgå skum
13. Centrifuger ved 9400 r/min i 15 minutter, overfør supernatanten til et nyt frosset centrifugerør efter lavtemperaturcentrifugering
14.Opdel i flere dele og frys dem med flydende nitrogen og opbevar dem (langtidsopbevaring skal være ved - 80 ℃, korttidsopbevaring skal være ved - 20 ℃)
\

Contact Us

*We respect your confidentiality and all information are protected.