Som et hjælpemateriale i ELISA-detektionsforsøg, et enzym plade spiller en afgørende rolle og påvirker direkte de endelige forsøgsresultater. Kvaliteten af Enzymplade afhænger hovedsageligt af dets følsomhed over for proteinadsorption, forskellen i proteinadsorptionskapacitet mellem plader og huller og forskellen mellem partier af det købte enzymplade . Derfor vælger man en enzymplade produkt med høj proteinadsorptionsfølsomhed, den lille forskel mellem huller med proteinadsorptionskapacitet og en lille forskel mellem batches er garantien for, at forsøgslederen opnår pålidelige og stabile eksperimentelle resultater.

Enzymplade klassificering: i henhold til forskellige klassifikationsstandarder, pladen har forskellige klassifikationer.

1: Alt efter antallet af huller kan den opdeles i 96 huller, 48 huller osv. Fordi den enzymplade bruges hovedsageligt sammen med mikropladelæseren, den plade meter på markedet er højst 96 huller, så mikropladen er på 96 huller.

2: Ifølge de forskellige bunde er den opdelt i flad bund, U bund, V bund osv.

Brydningsindekset for den flade base er lavt, hvilket er velegnet til påvisning i mikropladen;

T U-mikropladens brydningsindeks er højt, praktisk til prøveudtagning, prøveudtagning og blanding og kan direkte observere farveændringen uden at placere den på mikropladen for at bestemme, om der er en tilsvarende immunreaktion.

Mikropladen på V-basen kan nøjagtigt absorbere prøven.

3: I henhold til mikropladens og proteinets og andre molekylers forskellige bindingsevner er den opdelt i høj bindingskraft, medium bindingskraft og aminering.

(1) Høj bindekraft

Efter overfladen af ​​denne mikroplade er dens proteinbindingsevne stærkt forbedret, op til 300 ~ 400 ng IgG/cm2, og molekylvægten af ​​det hovedbundne protein er > 10 kD. Brugen af ​​denne klasse af mikroplader kan forbedre følsomheden og kan reducere koncentrationen og mængden af ​​coated protein relativt, hvilket er lettere at producere uspecifikke reaktioner. Efter belægning med antigen eller antistof kan det ikke-ioniske detergent ikke effektivt forsegle stedet for det ubundne protein, og proteinet bør bruges som tætningsmiddel.

(2) Middel bindekraft

Sådanne mikropladeplader binder sig passivt til proteinet gennem hydrofobe bindinger på overfladen og er velegnede som fastfasebærere for makromolekylære proteiner med molekylvægt > 20 kD, med en proteinbindingskapacitet på 200 til 300 ng IgG/cm2. På grund af egenskaberne ved dets eneste binding til makromolekyler er det velegnet til fastfase-bærere som urensede antistoffer eller antigener for at reducere potentialet for uspecifik krydsreaktivitet. Pladen kan være et inert protein eller et ikke-ionisk detergent som en forseglingsopløsning.

(3) Aminering

Denne mikroplade har efter en overflademodifikation en positivt ladet aminogruppe, hvis hydrofobe binding er erstattet af en hydrofil binding. Denne klasse af mikroplader er velegnet som en fastfasebærer til småmolekylære proteiner. Ved hjælp af en passende buffer og pH binder overfladen til negativt ladede små molekyler via ionbindinger. På grund af dens overflades hydrofile egenskaber og dens evne til at blive kovalent bundet af andre tværbindere, kan den bruges til at fiksere proteinmolekyler, der er opløselige i dekontamineringsmidler såsom Triton-100, Tween 20 osv. Defekten på denne plade er på grund af reduceret hydrofobicitet; desuden skal overfladen være effektivt lukket. På grund af de hydrofile og kovalente overfladeegenskaber skal den anvendte forseglingsopløsning være i stand til at interagere med enhver funktionel gruppe i den ikke-reaktive aminogruppe og den valgte tværbinder.

4. Ifølge farven kan de opdeles i gennemsigtig, sort og hvid.

Transparent er den mest almindeligt anvendte til de mest generelle enzymforbundne immuniseringsforsøg. I Relcontrast til den transparente mikroplade er der også uigennemsigtige mikroplader til lysdetektion, generelt sort og hvid. Selve den sorte mikroplade har lysabsorption, så dens signal er meget lavere end den hvide mikroplade, så den bruges generelt til at detektere stærkt lys, såsom fluorescensdetektion. Den hvide mikroplade bruges til svag lysdetektion, ofte brugt til generel kemiluminescens. Derudover kan den sorte mikroplade også svække problemet med uspecifikke reaktioner. Samtidig er det vigtigt at bemærke, at med den generelle mikroplade kan lysdetektion ikke være lysende, fordi lyset, der udsendes fra kemiluminescensreaktionen, er isotropt, hvis lyset med en gennemsigtig mikroplade ikke kun spredes fra lodret retning, men også fra den vandrette retning, gør lys let gennem mellemrummet mellem hullet og hulvæggen, hvilket resulterer i lyset af lysabsorptionsværdien af ​​hullet påvirkes af det tilstødende hul-emitterede lys.

En god mikroplade skal have god adsorptionsydelse, lav blankværdi, høj gennemsigtighed af hulbunden og lignende ydeevne mellem pladerne og mellem hullerne på den samme plade. På grund af forskellen i råmaterialer og forskellen i produktionsprocessen er kvaliteten af ​​forskellige produkter meget forskellig, derfor skal ydeevnen af ​​hver batch af mikroplade kontrolleres på forhånd før brug. De almindeligt anvendte inspektionsmetoder er en vis koncentration af humant IgG (generelt 10 ng/ml) belagt med ELISA-pladebrønde, efter vask, tilsætning af en passende fortynding af enzymmærket anti-humant IgG-antistof til hver brønd, vask efter varmekonservering, tilsætning af substratfarve, stop enzymreaktionen og mål absorbansen af ​​opløsningen i hver brønd. Reaktionsbetingelserne blev kontrolleret således, at aflæsningen af ​​hver brønd blev holdt ved en absorbans på omkring 0,8. Gennemsnittet af de samlede aflæsninger blev beregnet. Forskellen mellem gennemsnittet af alle individuelle aflæsninger og alle aflæsninger skal være mindre end 10 %. De følgende tre mikroplader er A, B og C som et eksempel.

Direkte metode: at detektere adsorptionen af ​​humant IgG på overfladen af ​​mikropladen

Dobbelt antistof sandwich metode: antigen i serum positivt for anti-humant antistof

Som det kan ses af ovenstående figur, har klasse A mikroplade i disse tre typer bioenzymplader en bedre proteinadsorptionseffekt, men forbedrer også følsomheden af ​​proteinadsorption, hvilket kan give mere pålidelige eksperimentelle data. Derudover kan du spørge om pladen med batchforskellen. Følgende er batchforskellen for en bestemt plade. Som det kan ses af datadiagrammet inden for batch-forskel, har mikropladen god inter-batch-stabilitet, og variationskoefficienten inden for batch (CV) er omkring 5,0 %, hvilket er væsentligt lavere end variationskoefficienten inden for batch. under 10,0 % i kvalitetskontrolstandarden for klinisk immunreaktion. Derfor er den også velegnet til ELISA-forsøg.