R ecovery

1. Fjern det frosne rør fra flydende nitrogen og over i et 37℃ vandbad straks, mens du ryster let. Efter at væsken smelter (ca. 1-1,5 minutter), tages noget alkohol ud og lægges på det ultra-rene arbejdsbord.

2. Tag cellesuspensionen ind i et 15 ml centrifugerør med 10 ml medium (vask det frosne rør med mediet og vask alle cellerne, der sidder fast på væggen) og centrifuger ved 1000°C i 5 minutter.

3. Supernatanten blev reverseret, og 1 ml af mediet blev tilsat for at suspendere cellerne. Ryg i et 10 cm fad med 10 ml medium og ryst forsigtigt til venstre og højre for at fordele cellerne jævnt i fadet.

4. Marker celletype og dato, menneskets navn og så videre, læg det i CO2-inkubatoren, sæt cellerne fast og skift medium.

5. Medium blev skiftet en gang hver 3. dag.

P assage

1. Planter blev passeret for at nå 80-90% dækning.

2. Abup det originale medie .

3. Tilsæt den passende trypsin (bare dæk cellerne) og fordøj i 1-2 minutter .

4. Fordøjelsen blev afsluttet ved at tilsætte et lige så stort volumen af ​​det serumholdige medium .

5. Blæs cellerne med en pipettepistol og lad dem alle suspenderes.

6. Celler blev aspireret ind i et 15 ml centrifugerør og centrifugeret ved 1000°C i 5 min.

7. Hæld supernatanten og tilsæt 1-2 ml medium for at sprænge alle cellerne i luften.

8. Celler blev overført til flere dyrkningsskåle afhængigt af cellearten. Generelt er kræftceller opdelt i 5 celler, og tre normale celler overføres. Fortsæt med at dyrke.

Fri til at fordøje cellerne og centrifugere dem (ibid. ovenfor).

Suspension cellerne med den matchende frosne opbevaringsopløsning, del dem i et steriliseret fryserør, hvil i et par minutter, og angiv celletypen og den frosne opbevaringsdato.4 ℃ 30 min., -20 ℃ 30 min. derefter opbevaret i flydende nitrogenperfusion.

Fremstilling af kryokonserveringsopløsning: 70% medium 20% FBS 10% DMSO. DMSO bør tilsættes langsomt og rystes jævnt.